Đơn giản hóa và cắt giảm lượng rác thải trong quá trình tách chiết Acid Nucleic

Đơn giản hóa và cắt giảm lượng rác thải trong quá trình tách chiết Acid Nucleic

ĐƠN GIẢN HOÁ VÀ CẮT GIẢM LƯỢNG RÁC THẢI TRONG QUÁ TRÌNH TÁCH CHIẾT ACID NUCLEIC

Tách chiết DNA và RNA hiệu quả chỉ trong ba bước – giải pháp tiết kiệm thời gian trong nghiên cứu và ứng dụng

Tách chiết DNA và RNA là một bước phổ biến trong các kỹ thuật sinh học phân tử. Tuỳ thuộc vào số lượng mẫu, thời gian thực hiện tách chiết qua các bước rửa, ly tâm lặp lại đòi hỏi khoảng thời gian thực hiện lên đến hàng giờ.

Hầu hết các bộ dụng cụ tách chiết hiện nay sử dụng công nghệ cột ly tâm màng silica (spin-column technology), trong đó DNA hoặc RNA liên kết với màng silica với sự hiện diện của “muối chaotropic” ở nồng độ cao, như guanidine hydrochloride. Thuật ngữ “chaotropic” là sự hình thành tác nhân hỗn loạn, giúp phá vỡ mạng lưới liên kết và cấu trúc của các đại phân tử. Quá trình này làm mất ổn định cấu trúc protein, giúp giải phóng DNA hoặc RNA khỏi nước để tạo điều kiện liên kết với màng silica trong cột. Với  phương pháp này, dư lượng muối chaotropic có thể còn tồn dư trong sản phẩm chiết xuất cuối cùng, làm giảm độ chính xác của việc định lượng acid nucleic và gây trở ngại cho các ứng dụng về sau, chẳng hạn như PCR.

Để khắc phục nhược điểm này, cần phải thực hiện quá trình rửa giải để làm giảm lượng muối chaotropic còn lại trong sản phẩm DNA hoặc RNA được ly trích. Tuy nhiên, quá trình rửa giải đòi hỏi việc lặp lại thao tác nhiều lần và khó thực hiện. Mỗi lần rửa yêu cầu thực hiện ly tâm với nhiều bước thao tác phức tạp, dễ dàng gây tạp nhiễm và sai sót. Hơn nữa, các bước rửa lặp lại này tạo ra nhiều vật liệu thải như ống ly tâm nhựa, hỗn hợp dung dịch gốc cồn và muối chaotropics độc hại và đòi hỏi phòng thí nghiệm cần có quy trình xử lý, thải bỏ bỏ một cách an toàn. Bên cạnh đó, các bước ly tâm liên tục mang đến rủi ro ảnh hưởng đến tính toàn vẹn của sản phẩm chiết xuất vì DNA hoặc RNA có thể bị cắt theo mỗi lần ly tâm, dẫn đến sản phẩm DNA / RNA bị phân mảnh. Cuối cùng, khả năng thu hồi sản phẩm DNA/ RNA cũng có thể bị ảnh hưởng bởi một phần DNA hoặc RNA vẫn còn liên kết với cột.

Khắc phục tất cả các nhược điểm của công nghệ cột ly tâm màng silica, bộ công cụ tách chiết axit nucleic GenElute™-E từ Merck mang đến một giải pháp thông minh giúp tối ưu hoá kỹ thuật và thời gian tách chiết.

Thay vì liên kết DNA / RNA với màng silica, công nghệ GenElute™-E Single Spin tách các axit nucleic dựa trên kích thước phân tử với nguyên lý sắc ký âm. Đầu tiên, mẫu cần được xử lý ban đầu để giải phóng các thành phần phân tử của tế bào. Sau đó, mẫu đã được xử lý được chuyển vào vật liệu nền. Thành phần protein với kích thước phân tử lớn hơn sẽ di chuyển qua chất nền chậm hơn các nucleotide. Đồng thời, các tạp chất như muối, chất tẩy rửa và dung môi hữu cơ được giữ lại trong chất nền. Như vậy, DNA/ RNA tinh khiết sẽ được thu nhận nhanh chóng chỉ với 1 lần ly tâm.

Công nghệ này giúp đơn giản hóa quá trình tách chiết acid nucleic vốn tốn nhiều công sức và thời gian. Phương pháp tách DNA / RNA dựa trên kích thước phân tử thay vì liên kết màng silica cũng giúp loại bỏ nhu cầu sử dụng muối chaotropic cũng như việc thực hiện rửa giải và ly tâm lặp lại để loại bỏ hoàn toàn hoá chất liên kết trên màng. Việc giảm số lần quay ly tâm xuống còn một lần duy nhất cũng loại bỏ nhược điểm các phân tử acid nucleic bị phân tách, duy trì tính toàn vẹn của các đoạn DNA chiết tách từ nhỏ đến 65 bp đến lớn nhất là 49.000 bp.

Đặc biệt hơn, với GenElute™-E, thể tích của mẫu DNA / RNA thu hồi sau tách chiết sẽ được bảo toàn gần bằng dung dịch mẫu ban đầu và có nồng độ đậm đặc hơn so với các phương pháp màng silica vì hạn chế đến mức tối đa hàm lượng DNA/RNA còn bám lại trên cột. Việc không sử dụng muối chaotropic trong quá trình tách chiêt loại bỏ nguy cơ dư lượng muối không mong muốn tồn đọng trong mẫu ảnh hưởng đến các ứng dụng về sau.

Sử dụng GenElute™-E, lượng chất thải nhựa sinh ra trong các quy trình rửa giải chỉ bằng 55% so với quy trình tách chiết bằng công nghệ ly tâm màng silica, mang đến một giải pháp tiết kiệm và an toàn hơn cho phòng thí nghiệm. Chiết xuất DNA /RNA với hàm lượng, độ tinh khiết và chất lượng cao đi đôi với an toàn và tiết kiệm, bộ dụng cụ tách chiết acid nucleic GenElute™-E Single Spin chính là giải pháp tối ưu cho các phòng thí nghiệm sinh học phân tử.

Bài viết được phối hợp thực hiện bởi Scientist Creative Services và Merck

Chịu trách nhiệm dịch thuật: R&A Marketing Team – Merck Việt Nam

Bài viết gốc: https://www.the-scientist.com/research-products-blog/simplifying-nucleic-acid-extraction-and-cutting-down-waste-68614

 

Tải về brochure sản phẩm tại đây

Loader Loading…
EAD Logo Taking too long?

Reload Reload document
| Open Open in new tab

Tải Xuống [434.80 KB]

    NHẬN TIN MỚI QUA EMAIL